Layton Kyouju to Eien no Utahime

Layton recibe una carta de la famosa cantante de ópera Jenis Quatlane, invitándoles a ver su nueva función. También pide ayuda a Layton, Luke y Remi en un misterio, diciendo que su amiga Melina murió hace un año, pero regresó más tarde siendo una niña de siete años diciendo que había encontrado el secreto de la vida eterna, y que también conocía todos los secretos que solo la verdadera Melina podía conocer. Naturalmente, el caso fascina a Layton y a su aprendiz, así que se dirigen a la ópera Crown Petone, pero Remi se queda en Londres, buscando a unas chicas que desaparecieron allí. La ópera trataba sobre un reino perdido, El Reino de los Inmortales; una vez, hubo una hermosa reina que amaba la música. Era querida por todos en el reino. Pero un día, la reina enfermó gravemente. La gente del reino trabajó para encontrar una cura, pero la medicina no pudo ayudar. La reina finalmente falleció y, justo después, se completó la cura: una poción para la inmortalidad. El pueblo del reino lamentó profundamente la muerte de su reina. Para volver a encontrarse con la reina reencarnada, decidieron volverse inmortales, usando el remedium de la inmortalidad recién completado. El Reino de Abrosia sigue en algún lugar de este mundo, esperando que su reina regrese, y entonces, ella cantará para siempre. Tras el espectáculo, aparece un hombre enmascarado y propone algo al público: "Juguemos a un juego" —dice— "El ganador tendrá vida eterna. Los perdedores tendrán que morir." Depende de Layton y Luke participar en el juego y descubrir el secreto de la Vida Eterna. Transcurre entre los eventos de los videojuegos Professor Layton y El último espectro y Professor Layton y la Máscara Milagrosa.